0215878294MP Bio G418 geneticin遗传霉素

MP Bio G418 geneticin遗传霉素

简单介绍：G418是一种对原核及真核细胞都具毒性的氨基糖苷类抗生素,它具有干扰蛋白合成的功能，可用来筛选表达G-418抗性基因(如:氨基糖苷3'磷酸转移酶[APH 3'])的培养细胞, 在分子遗传试验中常被用作抗性筛选。它通过抑制转座子Tn601，Tn5的基因对原核和真核等细胞产生毒素,包括细菌、酵母、植物和哺乳动物细胞,也包括原生动物和蠕虫。当neo基因被整合进真核细胞DNA后 ,则能启动neo基因编码的序列转录为mRNA,从而获得抗性产物的高效表达 ,使细胞获得抗性而能在含有G418的选择性培养基中生长。G418的这一选择特性 ,已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以广泛应用。

G418 Sulfate（G418liu酸盐），也称作Geneticin（遗传霉素），是一种结构类似于*B1（Gentamycin B1）的氨基糖苷类抗生素，通过影响80S核糖体功能和阻断延伸步骤来干扰蛋白合成，对原核和真核等细胞都有毒性 ,包括细菌、酵母、高等植物和哺乳动物细胞 ,也包括原生动物和蠕虫。其抗性基因（主要为neo基因）位于转座子Tn601（903）或Tn5（来源于细菌），但是可以在真核细胞中表达。通过基因重组技术将这些抗性基因导入细胞，使其获得对G418的耐药性，从而用来筛选和维持培养携带抗性基因的原核或者真核细胞。

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哺乳动物细胞中，当抗性基因neo被整合进真核细胞基因组后 ,使其编码表达氨基糖苷磷酸转移酶（amino-glycoside 3’-phosphotransferase，APH(3)II）。此酶通过共价修饰G418的氨基或羟基功能，抑制抗生素-核糖体间的相互作用，从而使得抗生素失活。这一特性赋予细胞产生抗性。稳转细胞株筛选实验，需要建立杀灭曲线（剂量反应曲线）确定杀死无抗性细胞的zui低有效浓度。

植物细胞中，通过转染携带nptII基因的抗性质粒孵育其抗性。nptII基因也能编码表达氨基糖苷磷酸转移酶，这个酶使得多种抗生素丧失活性，包括G418，*和*。

使用方法

1.       G418储存液的配制（50mg/ml，活性浓度）

1. 活力单位的换算

根据此公式进行换算：（1000/A₀）×A₁=A₂，其中A₀是G418的活力值（Potency），因批次而异。可见批次对应的质检报告，或者瓶子上的标签。A₁是想配制的活性G418浓度。A₂是实际称重的粉末与体积比浓度。

比如若所用批次的G418 活力值为：750 µg/mg，要配制50mg/ml的G418活性浓度，则实际要配制的粉末浓度为1000/750×50 mg/ml=66.33 mg/ml。

如果配制10ml的G418储存液（活性浓度，50 mg/ml），则需要称取663.3mg粉末。

1. 除菌和保存

根据上述换算得到的实际粉末称重量，加入10 ml无菌去离子水内使其*溶解。

先用5ml无菌去离子水预湿润0.22μm针头式过滤器，除尽水。之后使用此滤器过滤，除菌后分装成单次使用的小量（如1ml）放到-20℃冻存，1年稳定。