小鼠的白介素-16 ELISA试剂盒

试剂盒内容及其配制
试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制96/48人份酶标板

1块板（96T）半块板（48T）即用型
塑料膜板盖1块半块即用型
标准品:96IU/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀稀
空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型
标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型
生物素标记的抗CA724抗体 1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型
亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型
洗涤缓冲液1瓶（60ml）1瓶（30ml）按说明书进行稀释
底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型
底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型
终止液 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型

自备材料
1.蒸馏水。
2.加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500u、1000lul。
3.振荡器及磁力搅拌器等。

安全性
1.避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽

快用水冲洗。
2.实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3.不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

操作注意事项
1.试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标

准品应丢弃,不可保存。
2.实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
3.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。

保质前使用。
4.使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,

避免使用带金属部分的加样器。
5.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的

各种成份及样品。
6.洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔

中吸水。
7.底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长

时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取

OD值。
8.加入试剂的顺序应*,以保证所有反应板孔温育的时间一样.
9.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

样品收集、处理及保存方法
1.血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内

毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅

速小心地分离。
2.血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离

心30分钟去除颗粒。
3.细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保

存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血

清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度

加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

试剂的准备
1.标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释

前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行:96IU/ml6号标准

品原倍浓度不用稀释直接加入50ul。
48IU/ml5号标准品100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液

24IU/ml（4号标准品）100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释

液12IU/ml（3号标准品）100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀

释液6.0IU/ml（2号标准品）100ul的3号标准品加入100ul的标准品

稀释液3.0IU/ml（1号标准品）100ul的2号标准品加入100ul的标准

品稀释液100U/ml（空白对照）原始浓度不用稀释直接加入50ul。
2.洗涤缓冲液（20×）的稀释:蒸馏水20倍稀释。
操作步骤
1.使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以

免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个

标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能

使用复孔的尽量做复孔。
3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反

应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振

荡混匀,37℃温育1小时。
4.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水

纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次
5.每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分

钟。
6.每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避

免光照。
8.取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结

果。
9.在450nm波长处测定各孔的OD值。

建议使用的实验方案
标准品浓度（IU/ml） 
A 96 96 样品 样品 样品 样品 

样品 样品 样品 样品 样品 样品
B 48 48 样品 样品 样品 样品 

样品 样品 样品 样品 样品 样品
C 24 24 样品 样品 样品 样品 

样品 样品 样品 样品 样品 样品
D 12 12 样品 样品 样品 样品 

样品 样品 样品 样品 样品 样品
E 6.0 6.0 样品 样品 样品 样品 

样品 样品 样品 样品 样品 样品
F 3.0 3.0 样品 样品 样品 样品 

样品 样品 样品 样品 样品 样品
G 0 0 样品 样品 样品 样品 

样品 样品 样品 样品 样品 样品
H 样品 样品 样品 样品 样品 样品 

样品 样品 样品 样品 样品 样品
结果分析
以吸光度OD值为纵坐标（Y）,相应的CA724标准品浓度为横坐标

（X）,做得相应的曲线,样品的CA724含量可根据其OD值由标准曲线

换算出相应的浓度。
局限
6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到精确

的结果。
试剂盒性能
1.灵敏度:zui小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品

线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2.特异性:不与人其它细胞因子反应。
3.重复性:板内、板间变异系数均小于10%。