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GUS染色液使用说明书
阅读:1669 发布时间:2019-4-23GUS染色液使用说明书
【产品组成】
Component | SBJ-0569S 110ml | Store at |
试剂(A):GUS Buffer A | 50ml | 室温 |
试剂(B):GUS Buffer B | 1ml | 4℃,避光 |
试剂(C):GUS Buffer C | 1ml | 4℃,避光 |
试剂(D):2×Fixation Buffer | 25ml | 室温,避光 |
试剂(E):X-GlcA | 80mg | -20℃,避光 |
试剂(F):X-GlcA Solvent | 1ml | 室温,避光 |
试剂(G):Deionized Water | 110ml | 室温 |
【保存条件】
-20℃,避光;4℃,避光,12个月
【产品概述】
GUS(β-Galactosidase)基因是存在于E.coli等一些细菌基因组内的编码β-葡萄糖苷酸酶的一种水解酶,该基因常作为融合标记用于植物转基因分析和调控研究中。GUS受体基因系统有表达E.coliGUS酶的稳定性和在植物内的低活性,绝大多数植物没有检测到葡萄糖苷酸酶的背景活性,以β-葡萄糖苷酸酯类物质为底物,其反应产物可用多种方法检测出来。5-Bromo-chloro-3-indolylβ-D-glucuronide,cyclohexylammonium salt(简称为X-Gluc或X-GlcA)分子量为521.8,CAS号为18656-96-7,是检测大肠杆菌中GUS基因的底物,可快速检测植物中GUS基因融合标记。
β-葡萄糖苷酶基因染色试剂盒(β-Galactosidase Reporter Gene Staining Kit)简称为GUS染色液,其染色原理是适宜的反应条件下β-葡萄糖苷酶(GUS)可将X-Gluc水解成蓝色物质,该物质不溶解于转基因的细胞核组织中的靛蓝物质,具有GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点,可用肉眼或显微镜观察到,GUS染色液可用于生物化学活性分析、免疫分析以及组织和细胞的组织化学染色,多用于转基因植物的GUS基因表达分析。该试剂仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。
【使用方法】
1、配制X-GlcA Solution:取X-GlcA Solvent 229μl加入至80mg X-GlcA中或取适量上述2种物质溶解,使其浓度达到350mg/ml,轻轻Vortex混匀,即为Solution,分装后,-20℃避光保存。
2、按下列比例配制GUS染色液:
组分 | 体积 |
GUS Buffer A | 2.5ml |
GUS Buffer B | 40μl |
GUS Buffer C | 40μl |
Deionized Water | 5.4ml |
甲醇 | 2ml |
X-GlcA Solution | 20μl |
Tatal volume | ~10ml |
3、固定(固定不是必须的步骤,如果不需要固定,直接进行操作步骤4):
①取转基因植物组织,入3~5ml清洁小瓶或多孔板中。
②取适量2×Fixation Buffer与去离子水等量稀释即获得1×Fixation Buffer,加入1×Fixation Buffer使其*浸没组织,室温孵育45~60min,弃液。
③配制洗涤液:按GUS Buffer A:去离子水=1:20稀释即为洗涤液,用配制好的洗涤液漂洗3次,每次1min。
4、加入适量GUS染色液,使GUS染色液*浸没组织。
5、(备选)用真空泵抽取小瓶或多孔板中的气体,抽取时间应大于2min;该步骤是非必需步骤,目的是为了抽取植物组织内的气体,并使染色液更容易进入组织内。
6、立即盖紧瓶子或多孔板,37℃孵育24h;随着孵育时间的延长,蓝色渐渐出现,当表达量较高时,GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点。
7、用乙醇脱去样本的叶绿素,一般样本浸没于乙醇1~3h;如有必要可重复该脱色步骤,以便*清除叶绿素;样本保存于乙醇中可用肉眼或普通光学显微镜下观察。
【注意事项】
1、GUS染色液建议冰上配制,可以4℃避光保存3天。
2、减少GUS Buffer B、C的使用量会提高检测特异性(即减少假阳性),但常会导致无阳性结果,GUS Buffer B、C的使用量一般控制在4~40μl/10ml。
3、X-GlcA Solution应避免反复冻融,否则染色效率会下降。
4、由于组织特异性等原因,蓝色颜色反应可能不*一致,应注意摸索具体实验条件。