QIAGEN凯杰Ni-NTA Agarose几大特点
利用重力流层析纯化His-tagged蛋白
- 一步纯化就可从细胞裂解液中得到纯度大于95%的蛋白
- 高亲和力和高结合能力
- 可以选择在天然或变性条件下纯化蛋白
- 预先加载的即用型基质适合任何规模的蛋白纯化
- 提供自动纯化和检测的方法
Ni-NTA Agarose是亲合层析用基质，用于纯化带有His标签的重组蛋白。His标签上的*残基能高特异性的结合到固定的镍离子上。细胞裂解上清液上样到纯化基质上，His-tagged蛋白结合，其他蛋白则流过基质。洗涤后，His-tagged蛋白可在天然或变性条件下洗脱。
QIAGEN凯杰Ni-NTA Agarose几大特点
在天然条件下一步纯化蛋白。
在天然条件下纯化蛋白。人血清应答因子（SRF）在带有牛痘病毒载体的HeLa细胞中表达，使用Ni-NTA Agarose以及在洗涤和洗脱步骤中不同浓度的咪唑纯化。银染法使得蛋白可见。CL：细胞裂解物；FT：流过部分；W1: 0.8 mM洗涤液；W2 & W3: 8 mM 洗涤液；W4 & W5: 40 mM 洗涤液；E1 & E2: 80 mM 洗脱液。（数据由德国H. Stunnenberg, EMBL, Heidelberg提供。）
Performance
Ni-NTA Agarose中的Ni-NTA与Sepharose CL-6B support偶联，具有强结合能力，非特异性结合少（参见"One-step purification under native conditions"）。这种材料对于多数的生产规模和柱纯化具有的可操作性。Ni-NTA Agarose可单独订购，也包含在QIAexpress Kits中。QIAexpress Kits是适用于大肠杆菌His-tagged蛋白高效表达和纯化的完整试剂盒。
Principle
QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System基于获得的Ni-NTA（氨基三乙酸镍）树脂，对含有6个或以上*残基（连续或交替）亲合标签的蛋白选择能力强。该技术可在天然或变性条件下，从所有表达体系中一步纯化几乎所有的His-tagged蛋白。NTA含有四个镍离子螯合位点，与镍的结合能力比其他仅有三个金属螯合位点的金属螯合纯化方法的结合能力强。多出的一个螯合位点可防止镍离子脱落，因此具有更强的结合能力，蛋白纯度比金属螯合纯化方法的蛋白纯度高。QIAexpress技术可用于从杆状病毒、哺乳动物细胞、酵母和细菌等各种表达体系中纯化His-tagged蛋白。
Procedure
His-tagged蛋白的纯化包括四个步骤：裂解、结合、洗涤和洗脱（参见Protein purification with the Ni-NTA protein purification system）。使用QIAexpress 技术纯化重组蛋白无需依赖于蛋白的三维结构或6xHis标签。因此可实现在天然或变性条件下，从稀释溶液或细胞裂解液中一步纯化蛋白。可使用强变性剂和洗涤剂高效溶解和纯化受体、膜蛋白和形成包涵体的蛋白。洗涤缓冲液中可包含有能高效去除非特异性结合产物的试剂（见表）。在温和条件下加入100–250 mM咪唑作为竞争性洗脱试剂或降低pH值，可洗脱得到纯化蛋白。
