液相色谱仪的简单介绍
液相色谱仪是一种基于溶液相分离原理的分析仪器，主要用于分离、分析和纯化高沸点、热不稳定或大分子化合物（如蛋白质、核酸、药物、天然产物等）。其核心是通过流动相（液体）携带样品通过色谱柱，利用样品中各组分与固定相的作用力差异（如吸附、分配、离子交换等）实现分离，再通过检测器进行定性和定量分析。
分离机制
流动相：由溶剂（如甲醇、乙腈、水等）组成，通过高压泵输送，携带样品进入色谱柱。
固定相：填充在色谱柱内的颗粒状或多孔材料（如 C18、硅胶、离子交换树脂等），根据不同的分离模式（如反相、正相、离子交换、尺寸排阻等），与样品组分发生特异性相互作用。
分离过程：组分与固定相作用力弱的先流出，作用力强的后流出，从而实现分离。
检测原理
分离后的组分依次通过检测器，将物理或化学性质的变化转化为电信号，生成色谱图。常见检测方式包括：
紫外 - 可见检测（UV-Vis）：检测有紫外吸收的物质（如芳香族化合物、核酸）。
荧光检测（FLD）：对荧光物质（如维生素、药物）具有高灵敏度。
示差折光检测（RID）：通用型检测，无需样品发色团，但灵敏度较低。
质谱联用（LC-MS）：结合质谱实现高灵敏度定性分析。
高压输液系统
进样系统
色谱柱系统
检测系统
数据处理系统
按分离机制分类
反相色谱（RP-HPLC）：固定相为非极性（如 C18、C8），流动相为极性溶剂（水 - 甲醇 / 乙腈体系），适合分离极性至中等极性化合物。
正相色谱（NP-HPLC）：固定相为极性（如硅胶、氨基柱），流动相为非极性溶剂（如正己烷），用于分离非极性或低极性化合物。
离子交换色谱（IEC）：基于电荷差异分离，固定相为离子交换树脂，用于分析有机酸、碱、核酸等。
尺寸排阻色谱（SEC）：按分子尺寸分离，固定相为多孔凝胶，大分子先流出，小分子后流出，用于蛋白质、聚合物分子量分析。
按技术发展分类
适用范围广：可分析热不稳定、高沸点、大分子样品（如生物药物、天然产物），无需衍生化。
分离能力强：通过梯度洗脱和多样的固定相选择，可分离复杂混合物（如中药成分、蛋白质多肽）。
检测手段多样：兼容 UV、荧光、质谱等多种检测器，满足不同样品需求。
自动化程度高：支持自动进样、梯度洗脱和数据处理，适合高通量分析。
生物制药：抗体纯度分析、药物杂质检测、手性异构体分离。
食品与环境：农药残留（如果蔬中有机磷）、食品添加剂（如防腐剂、色素）、环境污染物（如多环芳烃）。
化学与材料：聚合物分子量分布、有机合成产物纯度分析。
临床检测：血液中药物浓度监测、代谢物分析。
| 项目 | 液相色谱仪（LC） | 气相色谱仪（GC） |
|---|
| 流动相 | 液体（如甲醇、水） | 气体（如氮气、氦气） |
| 样品要求 | 可溶解，无需气化，适合大分子、热不稳定物质 | 易挥发、热稳定，适合小分子物质 |
| 分离机制 | 吸附、分配、离子交换、尺寸排阻等 | 吸附、分配（主要基于挥发性差异） |
| 检测器 | UV、荧光、质谱等 | FID、TCD、ECD 等 |
| 典型分析时间 | 10~60 分钟 | 几分钟～30 分钟 |
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