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程：     

                                         菌落总数测试片

1 原理及适用范围：菌落总数是指样品经过处理，在一定条件下培养后所得1mL（g）检样或单位面积样品中所含菌落的总数，是zui常用的检测项目指标。菌落总数测试片（Aerobic Count Plates BB202）是一种预先制备好的一次性培养基产品，含有标准的营养培养基，冷水可溶性的吸水凝胶和脱氢酶指示剂——氯化三苯基四氮唑（TTC），菌落在测试片上呈紫红色或粉红色，这样可缩短计数时间和增强计数效果。本产品适合于食品及水中菌落总数的测定，也可用于与食品接触的容器操作台和其他设备表面的卫生检测。

2  样品处理与稀释

（1）生活饮用水：取充分混匀的水样（原液）检测。

（2）水源水：以无菌操作方法吸取1mL充分混匀的水样，注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内，混匀成1:10稀释液。用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内，振摇后成为1:100的稀释液，以此类推，做出1:1000等稀释度的稀释液，每次换一支吸管。

（3）食品：取样品 25 mL（g）放入含有225 mL灭菌生理盐水的取样罐或均质杯内，充分混匀成1:10稀释液。用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内，振摇后成为1:100的稀释液，以此类推，做出1:1000等稀释度的稀释液，每次换一支吸管。

3 接种：将菌落总数测试片（BB202）置于实验台面，揭开上层膜准备接种。生活饮用水、纯水和矿泉水取原液，每个样品做两片；水源水以及食品选择2～3个稀释度进行检测，每个稀释度同时应做一平行接种。以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL混匀的样品液，慢慢均匀地滴加到测试片上，然后再将上层膜缓慢盖下，静置5 min使培养基凝固，zui后用手轻轻地压一下。每次检测，同时将1mL灭菌生理盐水滴加到另一片测试片上作为空白对照。

4 培养： 将测试片叠在一起放回原自封袋中，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃，培养15～24h观察结果。

5 结果判读: 细菌在测试片上生长后会显示红色斑点，选择菌落数适中（10～100个）的测试片进行计数，乘以稀释倍数后即为每毫升（克）样品中所含的细菌菌落总数。作菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各测试片菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时用。

6 计数原则及报告方式

6.1通常选择菌落在10～100个之间的测试片进行计数，乘以稀释倍数报告之（见表1实例1）。

6.2若有两个稀释度的菌落数在10～100个之内，两者的比值小于2，则取其平均数，若大于2，则用值小者（见表1实例2、例3）。

6.3若三个稀释度的菌落数都有在10～100个之内，应选择二个低数值的平均数（见表1实例4）。

6.4若三个稀释度的菌落数均小于10个或大于100个时，应重新试用更低或更高的稀释度进行菌落计数；或采用均小于数量标准的zui小值，或采用均大于数量标准的zui大值（见表1实例5、例6）。

6.5若所有稀释度的测试片均无生长，以未检出报告之。菌落数在100以内时按实有数报告，大于100时，采样两位有效数字，在两位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算，为了缩短数字后面的零数也可用10的指数来表示。

表1  稀释度选择及菌落总数报告方式

7 表面取样方法：加1mL灭菌生理盐水在测试片上，静置至少1h使培养基凝固；提起上层膜，使中央滤纸部分贴到待测物表面，用手在外侧轻压；然后将上盖膜合上，置培养箱内培养。