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EDTA脱钙液使用说明书
【产品组成】
Component | SBJ-0312S | SBJ-0312M | Store at |
EDTA 脱钙液 | 500ml | 5L | 4℃ |
【保存条件】
4℃,12个月
【产品概述】
在组织切片过程中,一些组织内含有a骨质或钙化灶时,含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。这是因为钙和石蜡之间的密度不同,较难切出完整的切片。对含钙组织建议固定之后,再进行脱钙或二者同时进行。然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。用于脱钙的试剂很多,脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及电解法脱钙。EDTA是一种相对较好的螯合脱钙剂,对组织结构影响小,可以较好的保存组织的某些酶类,经EDTA脱钙后的组织可以进行免疫组化和原位杂交染色。但是该法脱钙速度太慢,一般脱需要数周至数月。
EDTA 脱钙液主要由EDTA、磷酸盐等组成,pH值为7.2。其优点是:①经EDTA 脱钙的组织染色结果好;②对组织的结构损害小。其缺点是:①脱钙速度很慢,不适合常规标本脱钙使用;②脱钙后组织会稍微变硬;③不宜用化学方法确定脱钙终点。
【使用方法】
1、骨组织脱钙时,取材不易过厚,一般大约5mm。
2、组织固定后,用PBS清洗3次,每次20min。
3、组织用蒸馏水洗清洗3次,每次20min。
4、组织转移至20~30倍体积的EDTA 脱钙液中,脱钙10~30天或更长时间。如果想加快脱钙速度,可以置于37℃进行脱钙。如果必要,更换新的EDTA 脱钙液继续脱钙,多数组织脱钙2周~3个月即可,每周更换一次直至终点。亦可采用微波快速脱钙法:微波炉设在200W左右的档位,每次加热5min,依据组织厚度和密度重复3~5min,中间间隔3~5min。
5、用蒸馏水冲洗数次。
6、常规脱水、包埋。
【注意事项】
1、厚度5mm的骨组织块脱钙时间一般脱钙10~30天即可,大多数在14~60天即可。
2、适当加温能加快脱钙的速度,一般不应超过37~40℃,温度过高容易使骨组织造成松散解体,尤其不可大于60℃。
3、脱钙应*,防止脱钙不足或过度。脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间,以免脱钙过长引起组织损害。
4、脱钙用具避免使用金属容器,尽量使用玻璃容器。
5、骨组织脱钙应先固定后脱钙或脱钙固定同时进行,不应先脱钙后固定,以便减少组织的损伤程度。
6、每隔一段时间检测一次脱钙程度,脱钙过度会增加组织的损伤程度,影响染色结果。
7、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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