GUS染色液使用说明书 

【产品组成】

【保存条件】

-20℃,避光;4℃,避光,12个月

【产品概述】

  GUS(β-Galactosidase)基因是存在于E.coli等一些细菌基因组内的编码β-葡萄糖苷酸酶的一种水解酶，该基因常作为融合标记用于植物转基因分析和调控研究中。GUS受体基因系统有表达E.coliGUS酶的稳定性和在植物内的低活性，绝大多数植物没有检测到葡萄糖苷酸酶的背景活性，以β-葡萄糖苷酸酯类物质为底物，其反应产物可用多种方法检测出来。5-Bromo-chloro-3-indolylβ-D-glucuronide，cyclohexylammonium salt(简称为X-Gluc或X-GlcA)分子量为521.8，CAS号为18656-96-7，是检测大肠杆菌中GUS基因的底物，可快速检测植物中GUS基因融合标记。

  β-葡萄糖苷酶基因染色试剂盒(β-Galactosidase Reporter Gene Staining Kit)简称为GUS染色液，其染色原理是适宜的反应条件下β-葡萄糖苷酶(GUS)可将X-Gluc水解成蓝色物质，该物质不溶解于转基因的细胞核组织中的靛蓝物质，具有GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点，可用肉眼或显微镜观察到，GUS染色液可用于生物化学活性分析、免疫分析以及组织和细胞的组织化学染色，多用于转基因植物的GUS基因表达分析。该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

【使用方法】

1、配制X-GlcA Solution：取X-GlcA Solvent 229μl加入至80mg X-GlcA中或取适量上述2种物质溶解，使其浓度达到350mg/ml，轻轻Vortex混匀，即为Solution，分装后，-20℃避光保存。

2、按下列比例配制GUS染色液：

3、固定(固定不是必须的步骤，如果不需要固定，直接进行操作步骤4)：

①取转基因植物组织，入3～5ml清洁小瓶或多孔板中。

②取适量2×Fixation Buffer与去离子水等量稀释即获得1×Fixation Buffer，加入1×Fixation Buffer使其*浸没组织，室温孵育45～60min，弃液。

③配制洗涤液：按GUS Buffer A:去离子水=1:20稀释即为洗涤液，用配制好的洗涤液漂洗3次，每次1min。

4、加入适量GUS染色液，使GUS染色液*浸没组织。

5、(备选)用真空泵抽取小瓶或多孔板中的气体，抽取时间应大于2min；该步骤是非必需步骤，目的是为了抽取植物组织内的气体，并使染色液更容易进入组织内。

6、立即盖紧瓶子或多孔板，37℃孵育24h；随着孵育时间的延长，蓝色渐渐出现，当表达量较高时，GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点。

7、用乙醇脱去样本的叶绿素，一般样本浸没于乙醇1～3h；如有必要可重复该脱色步骤，以便*清除叶绿素；样本保存于乙醇中可用肉眼或普通光学显微镜下观察。

【注意事项】

1、GUS染色液建议冰上配制，可以4℃避光保存3天。

2、减少GUS Buffer B、C的使用量会提高检测特异性(即减少假阳性)，但常会导致无阳性结果，GUS Buffer B、C的使用量一般控制在4～40μl/10ml。

3、X-GlcA Solution应避免反复冻融，否则染色效率会下降。

4、由于组织特异性等原因，蓝色颜色反应可能不*一致，应注意摸索具体实验条件。