ELISA法检测沙眼衣原体抗体

    沙眼衣原体有3个生物学变种，其中2个与人类疾病有关，引起沙眼及包涵体结膜炎。沙眼是世界范围流行的眼病，是致盲的重要原因。此外，沙眼衣原体、人型支原体、解脲脲原体是引起人类泌尿生殖系统感染的重要病原体，尤以沙眼衣原体更重要。常用检查方法有ELISA和生物芯片法检测沙眼衣原体抗体。

    [检测方法]  ELISA法

    [方法学原理）  在已包被沙眼衣原体抗原的微孔板孑L内，加入待测血清和HRP-抗人Ig，再加入酶底物显色。根据显色强度可判定沙眼衣原体抗体的有无及水平。

    [试剂]

    1．预包被微孔板

    2．洗涤液

    3．HRP-抗人IgG

    4．阴性对照、阳性对照

    5．底物液

    6．终止液

    [仪器]  酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。

    [检测步骤]

    1．从试剂盒中取出已包被沙眼衣原体抗原的微孔板和所有试剂，预温至室温。

    2．将待检血清、校准血清、阴性和阳性质控血清用稀释液作1：20稀释。分别加至相应的微孔内，每孔100u1。空白孔加稀释剂100ul。

    3．室温环境中温育20min后用洗涤液洗3次，每次洗涤量250ul。

    4．各孔分别加HRP-抗人IgGl00~1，室温环境中温育20min，同上法洗涤3次。

    5．各孔加底物溶液100rtl，室温环境中温育10min显色，每孔加终止液100gl终止反应。

    6．在酶联免疫测定仪上测定450nm波长的吸光度。

    [正常参考值]  沙眼衣原体抗体阴性。

    [结果判断]

    1．将吸光度用下列公式换算成ISR值：

ISR＝样品的吸光度÷（校准物的平均吸光度×校正因子）

（校正因子在校准血清的标签上）

    2．待测血清ISR值≤0．9为阴性。

    3．待测血清ISR值为0．91一1. 09为可疑阳性，应重新检测或随诊。

    4．待测血清ISR值≥1．10为阳性。

    [注意事项]

    1．每次试验均须设置阳性与阴性质控血清和校准血清测定孔。

    2．用450nm波长，试剂空白的吸光度必须<0．15；阴性质控血清的吸光度必须<0．25；阳性质控血清的吸光度必须≥0．50；校准血清的吸光度必须≥0．25。