《粮油检验油料油脂中黄曲霉毒素B1的测定荧光定量快速检测法》行业标准征求意见

2023-12-12 15:47:06 来源：仪表网阅读量：9438

　　国家粮食和物资储备局组织起草的《粮油检验油料油脂中黄曲霉毒素B1的测定荧光定量快速检测法》行业标准已形成征求意见稿，现向社会公开征求意见，截止日期为2024年2月8日。

　　黄曲霉毒素是黄曲霉和寄生曲霉等在生长繁殖过程中产生的次生有毒代谢产物，是双呋喃环类毒素，其衍生物有约 20 种，主要是 B1、B2、G1、G2、M1、M2 等。黄曲霉毒素被世界卫生组织癌症研究机构划定为一类天然存在的致癌物，其中以 B1 的毒性最大，致癌性最强。粮食和植物油料均会受到黄曲霉毒素的污染，尤其是花生和玉米更容易被污染。在花生油和玉米油的生产中，原料花生仁和玉米胚中的黄曲霉毒素会转移至花生油、玉米油和花生饼粕、玉米饼粕中，对食用油脂和饲料饼粕的质量安全造成威胁。GB 2761-2017《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》中对花生和玉米胚及其油脂中 AFB1 做出≤20µg/kg 限量要求。

　　GB 5009.22-2016《食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素 B 族和 G 族的测定》中列出了 5 种检测方法，即第一法同位素稀释液相色谱-串联质谱法，第二法高效液相色谱-柱前衍生法，第三法高效液相色谱-柱后衍生法，第四法酶联免疫吸附筛查法，第五法为薄层色谱法。其中的高效液相色谱法、酶联免疫吸附法以高灵敏度、精密度和便于自动化而被应用于油脂企业。然而，高效液相色谱法检测成本高，仪器价格高，维护费用高，分析时间长，前处理复杂；酶联免疫吸附法虽然在检测成本上略好，但准确性和重现性却有待提高。

　　近年来，黄曲霉毒素 B1 快速检测方法已在油脂生产企业广泛使用，它具有操作简单、样品用量少、测定速度快、重现性好、结果可靠等特点，尤其在油料、油脂、饼粕的日常生产检验，特别是其高密度检测中显现更大的优势。并且，黄曲霉毒素 B1 快检法也已普遍应用于粮食和饲料领域，并出台了多个行业标准和地方标准，包括：LS/T 6111-2015 《粮油检验粮食中黄曲霉毒素 B1 测定胶体金快速定量法》，NY/T 2550-2014 《饲料中黄曲霉毒素 B1 的测定胶体金法》，DB36/T 1024-2018 《饲料中黄曲霉毒素的快速筛查胶体金快速定量法》。因此，从生产实际出发，油料油脂领域也需要把黄曲霉毒素 B1 快检法提升为标准方法，并加以推广应用，为食用植物油生产中 AFB1 实时检测和监控提供支持。此外，粮食和饲料所采用的快检标准方法多为胶体金法，胶体金法只能实现定性和半定量，而荧光定量法能够实现指标定量的快速检测，能够更精准的对黄曲霉毒素进行监控。因此制定油料油脂生产中黄曲霉毒素 B1 荧光定量快速检测方法是非常必要的，对可靠监控油料油脂生产中黄曲霉毒素 B1 风险、实现粮油行业的高质量发展具有重要意义。

　　本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件起草单位：河南工业大学，费县中粮油脂工业有限公司，中粮油脂控股有限公司，河北玉星食品有限公司，长寿花食品股份有限公司。

　　本文件规定了黄曲霉毒素B1的荧光定量快速检测方法的原理、试剂、仪器设备及材料、样品制备、样品测定、结果判定和检测限。本文件适用于花生仁、玉米胚等油料及其油脂和饼粕中黄曲霉毒素B1的快速检测。

　　原理：

　　采用荧光侧向免疫层析方法学原理，将待测样品滴加在加样区，样品中的黄曲霉毒素B1与结合垫中的荧光微球标记黄曲霉毒素B1抗体结合并通过毛细作用向前层析，达到检测区后，检测线T线上固定的黄曲霉毒素B1抗原与剩余未结合的荧光微球标记黄曲霉毒素B1抗体结合。检测线T线上结合的荧光微球标记黄曲霉毒素B1抗体的量与样品中黄曲霉毒素B1的浓度成反比。层析结束后，采用荧光定量快速检测仪读取T线和C线的荧光强度并计算T/C值，通过仪器内置的标准曲线即可计算出样品中黄曲霉毒素B1的含量并判断阴阳性。

　　仪器设备及材料：

　　实验室常规仪器、设备及材料。

　　1.粉碎机：可使试样粉碎后全部通过20目标准筛。

　　2.天平：分度值 0.01g。

　　3.漩涡振荡器。

　　4.黄曲霉毒素 B1荧光定量快速检测卡(2)：具体储存条件参照使用说明。

　　5.离心机。

　　6.恒温孵育器：孵育温度 37℃，工作条件：环境温度 5-37℃，环境湿度不大于80%。

　　7.荧光定量快速检测仪(3)：工作条件：环境温度 5-40℃，环境湿度不大于 90%。

　　8.ID 卡。

　　9.条形码。

　　样品测定：

　　1.检测前准备

　　1.1 将待用黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测卡、样品提取液、样品稀释液恢复至室温。

　　1.2 将检测卡恒温孵育器开机，待温度升至37℃后即可使用。

　　1.3 将荧光定量快速检测仪开机，预热10min，插入本批次产品所对应的ID卡(每批次产品只需插一次即可)，如需切换检测项目，扫描相应项目和批次的条形码即可。

　　2.样品检测

　　2.1 从包装袋中取出黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测卡，水平置于检测卡恒温孵育器上。

　　2.2 用移液枪吸取稀释后的待测液100ul加到检测卡上的加样孔中，开始计时孵育8min。

　　2.3 孵育结束后，将检测卡插入荧光定量快速检测仪中，按读数键或触摸屏幕读数即可。

　　结果判定：

　　1.定量检测结果将呈现于荧光定量快速检测仪液晶显示屏上，同时可按打印键打印获得纸质的检测报告(平行测定次数可根据使用方质量控制要求进行调整，定量检测结果保留2位小数)。

　　2.阴性(-)：检测结果

　　3.阳性(+)：检测结果≥cut-off值(可根据使用方质量控制要求进行调整)。

　　4.无效：检测仪报错，则本次检测无效，需重新测试。

　　5.检测结果超出定量范围的上限，可取离心后的上清液(6.2.4)，用样品提取液稀释5倍后混匀，再按(6.2.5)检测，检测结果乘以5，即为样品中黄曲霉毒素B1的最终含量。

　　更多详情请见附件。

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