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《食用菌中凝集素的测定 高效液相色谱法》国家标准征求意见

2021-10-15 08:46:44 来源：仪表网 阅读量：7493

　　根据国家标准化管理委员会国家标准制修订计划，由中国标准化研究院提出并归口的《食用菌中凝集素的测定 高效液相色谱法》(计划号：20202637-T-424)国家标准现已形成征求意见稿，按照《国家标准管理办法》的有关规定，现向社会各界公开征求意见。
 
　　目前，食用菌是一种富含多种活性成分的优良蔬菜，我国是世界食用菌生产第一大国，目前食用菌产量占全球总产量的75%以上，2014年，全国食用菌产量已超过3000万吨。食用菌产品出口126个国家和地区，食用菌出口量约占亚洲出口总量的80%，占全球贸易量的40%。食用菌总产值在我国种植业中的排名，仅次于粮、棉、油、菜、果，居第六位。食用菌产业已成为我国种植业的一项新兴的支柱产业和新的经济增长点。其中2011年，我国食用菌产值已超过1400亿元，出口创汇达24.07亿美元。
 
　　食用菌产品主要以鲜销、干制、盐渍、速冻等方式为主，在其加工生产过程中会产生大量的废弃物，主要有菌脚、菇片、菌柄基部等。这些废弃物难以食用或商品价值低，开发利用率极低，多限于在动物饲料和有机肥中使用，因此对食用菌加工废弃物中的主要活性成分进行深入研究，制定相应的标准是企业快速发展和进行产品质量控制的需要。
 
　　凝集素的检测方法在国内外还没有统一标准，因此急需建立一套科学合理的凝集素检测体系，为凝集素产品研发及食用菌综合开发利用提供依据，进而引导生产，规范市场。所以，本标准的制定也是完善食用菌及其加工产品检测方法国家标准的需要。
 
　　高效液相色谱(HPLC)是目前能够快速分析凝集素的重要技术手段，可以结合超滤、离子交换层析、分子排阻层析以及亲和层析等技术，从而获得高纯度的凝集素，提高了纯化的效率。
 
　　本标准规定了基于高效液相色谱法的食用菌中凝集素的测定方法的范围、规范性引用文件、原理、试剂和材料、仪器和设备、食用菌中凝集素的测定方法、结果计算与表示、精密度。
 
　　本标准的主体内容包括：范围、规范性引用文件、原理、试剂、仪器和设备、测定步骤、空白试验、结果计算与表示、精密度和回收率、检出限、检验报告等。
 
　　方法原理：
 
　　试样中菌菇凝集素经硫酸铵沉淀、超滤富集后，高效液相色谱法测定，以保留时间定性，外标法定量。
 
　　仪器和设备：
 
　　1.高效液相色谱仪：配紫外检测器。2.超声波振荡器。3.分析天平，感量 0.01g 和 0.0001g。4.离心机，5000 r/min 以上。5. 破壁机。6.超滤离心管：50 mL，10 kd。7.容量瓶：5 mL。8.烧杯：50 mL，500 mL。9.凝胶色谱柱，TSKgel G2000SWXL，7.8 mm I.D.×30 cm，5 μm，或相当规格色谱柱。10.针式微孔过滤器：0.22 um，直径 13 mm 的聚四氟乙烯(PTFE)滤膜或者相当者。11.离心管：50 mL。
 
　　凝集素提取：
 
　　鲜样：
 
　　取处理好的鲜样 50 g 于破壁机中，加入 1:30 的磷酸盐提取液匀浆，匀浆完成后放入 500 mL 烧杯中，在超声波振荡器中超声 30 min，超声完成后在 4℃冰箱中放置 4 h。放置混匀后称取 20 g 匀浆以 8000r/min 的转速离心 20 min，离心完成后用滤纸过滤，取过滤后的滤液 5 g 放入烧杯中，加入 5 g 30%的硫酸铵溶液，并用超滤离心管以 8000 r/min 的转速离心 15 min 超滤 6 次，将超滤之后的上清液转入 5 mL容量瓶中，用水定容，过 0.22 um 的水系针式滤膜，以供液相检测使用。
 
　　干样：
 
　　取处理好的干样1 g于烧杯中，加入1:45的磷酸盐提取液在超声波振荡器中超声30 min，超声完成后在4℃冰箱放置 4h。放置混匀后称取20 g以8000 r/min的转速离心20 min，离心完成后用滤纸过滤，取过滤后的滤液 2g放入烧杯中，加入10 g 30%的硫酸铵溶液，并用超滤离心管以8000 r/min的转速离心15 min超滤6次，将超滤之后的上清液转入5毫升容量瓶中，用水定容，过0.22 μm的水系针式滤膜，以供液相检测使用。
 
　　本标准适用于食用菌中凝集素的测定。
 

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